《24小时健身房》讲述了一群在健身房相遇的都市男女,在挥汗如雨的锻炼中找到人生方向,重新定义自己的故事。姜贤宇(李俊赫饰)是一位退役运动员,因伤病不得不离开赛场,但他并未放弃对运动的热爱,创办了一家24小时营业的健身房。赵智妍(文佳煐饰)是健身房里最受欢迎的教练,性格直率,充满正能量,但她自己也面临着职业瓶颈,不确定是否要继续这份工作。朴泰锡(尹均相饰)是一名金融分析师,长期被职场压力折磨,决定开始健身寻找人生的平衡。而韩娜英(李周映饰)是一名朝九晚五的上班族,她本是个运动小白,却在健身房意外结识了一群让她重新燃起斗志的朋友。在这座24小时不打烊的健身房里,每个人都在挑战自我,面对人生的困难,并收获友谊、爱情与成长。